人葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)elisa定量检测试剂盒分析

人GLUT1 ELISA试剂盒是专用于定量检测人血清、血浆、组织匀浆及细胞上清中GLUT1蛋白浓度的成熟科研工具，采用双抗体夹心法，灵敏度普遍≤0.1 pg/mL，具备高重复性（板内CV<10%）和强特异性，但仅限科研使用，不可用于临床诊断2。

核心信息
‌检测原理‌：采用双抗体一步夹心法。包被微孔捕获GLUT1，加入HRP标记检测抗体后形成"抗体-抗原-酶标抗体"复合物，显色后用酶标仪在450nm读取吸光度（OD值）。
‌主要用途‌：体外定量检测血清、血浆、组织匀浆等样本中的GLUT1含量，‌不用于临床诊断‌。
样本要求与处理
‌样本类型‌：血清、血浆、细胞培养上清、组织匀浆等‌。
‌关键处理步骤‌：
‌血清‌：室温凝固10-20分钟后，2000-3000×g离心20分钟，收集上清。避免反复冻融。
‌血浆‌：使用EDTA或肝素抗凝，采集后30分钟内2-8℃下2000-3000×g离心20分钟。为减少血小板干扰，可进一步离心。
‌组织匀浆‌：匀浆后10000-14000×g离心3-5分钟，取上清。
‌保存‌：处理后的样本上清可立即检测或分装后于-20℃或-80℃冷冻保存，避免反复冻融‌。
试剂盒组成与操作
‌典型组成‌（以某品牌为例）：
预包被微孔板（96T或48T）
标准品（系列浓度，如0.3mL×6管）
样品稀释液、检测抗体-HRP、底物A液、底物B液、终止液
20×洗涤缓冲液、封板膜、自封袋
‌关键操作步骤‌：
‌试剂准备‌：2-8℃保存试剂盒，使用前室温平衡20分钟。浓缩洗涤液需水浴加热至结晶完全溶解。
‌加样‌：标准品孔加不同浓度标准品（如50μL），样本孔加待测样本（如10μL）+样本稀释液（40μL），空白孔不加。
‌温育‌：每孔加入HRP标记检测抗体（如100μL），封板膜封住，37℃水浴或恒温箱温育60分钟。
‌洗涤‌：弃去液体，每孔加满洗涤液，静置1分钟后甩干，重复洗板5次。
‌显色与终止‌：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15分钟，然后加入终止液50μL。
‌读数‌：15分钟内于450nm波长处测定各孔OD值。
结果计算
‌绘制标准曲线‌：以标准品浓度为横坐标，对应OD值为纵坐标，绘制标准曲线（推荐线性回归或四参数逻辑拟合）。
‌计算样本浓度‌：根据标准曲线方程和样本OD值，计算GLUT1浓度。
性能与注意事项
‌性能参数‌（以某品牌为例）：
‌灵敏度‌：最低检测浓度小于1.0 pg/mL。
‌特异性‌：不与其它可溶性结构发生交叉反应。
‌线性范围‌：标准品线性回归相关系数R值≥0.9900。
‌注意事项‌：
严格按说明书操作，避免试剂污染或失效。
洗板要彻底但避免过度，防止结合复合物洗脱。
显色反应需避光进行，严格控制时间。