生物素标记蛋白的操作及处理方法

       生物素标记蛋白是一种广泛应用于免疫检测、蛋白质相互作用研究和信号放大技术中的关键手段。其原理是利用生物素与亲和素/链霉亲和素之间极高的亲和力（Kd ≈ 10⁻¹⁵ M），实现对目标蛋白的高效捕获或可视化检测 。该技术可通过化学法或酶促法实现，适用于抗体、重组蛋白等多种类型的目标分子。生物素标记蛋白的操作方法如下：

一、操作步骤
‌蛋白预处理‌：

将蛋白溶解于0.1M PBS（pH 7.2）或0.1M碳酸氢钠缓冲液（pH 8.0）中，浓度调整为1-10 mg/mL。
通过超滤或透析去除含自由氨基的缓冲液（如Tris、甘氨酸）。
‌生物素标记‌：

溶解生物素（如Sulfo-NHS-Biotin）于超纯水或DMSO中，浓度为20 mg/mL。
按生物素与蛋白摩尔比（1:12至1:20）加入蛋白溶液，室温反应1小时。
‌纯化与保存‌：

通过葡聚糖凝胶层析或透析去除游离生物素。
加入叠氮钠（0.5 g/L）和BSA（1.0 g/L）保护，4℃或-20℃保存。
二、关键参数
‌生物素用量‌：10 mg/mL蛋白需生物素过量12倍，2 mg/mL蛋白需过量20倍。
‌反应条件‌：室温1小时或冰上2小时。
三、注意事项
避免含自由氨基的缓冲液（如Tris、甘氨酸）。
生物素溶液需新鲜配制，避免反复冻融。
标记后需检测纯度和活性。