消化后细胞如何处理冻存

消化后的细胞冻存，核心是‌“慢冻快融”‌，用DMSO做保护剂，控制好降温速率。

一、冻存前准备
‌细胞状态确认‌：消化后细胞需处于对数生长期（80%-90%汇合度），活率＞90%。
‌冻存液配制‌：常用配方为90%完全培养基+10%DMSO（或甘油），提前预冷至4℃。
‌器材准备‌：冻存管（1.5-2ml）、程序降温盒、记号笔、-80℃冰箱或液氮罐。
二、冻存操作步骤
‌细胞收集‌：消化后离心（800-1000 rpm，2-3分钟），弃上清，用预冷冻存液重悬（细胞密度建议1×10⁶-5×10⁶个/mL）。
‌分装标记‌：将细胞悬液分装至冻存管，标记细胞名称、代数、日期及操作者。
‌程序降温‌：
‌推荐方法‌：用程序降温盒（含异丙醇），以-1℃/分钟速率降至-80℃。
‌次选方法‌：泡沫盒内塞棉花，预冷至4℃，放入-80℃冰箱过夜。
‌长期保存‌：24小时内转移至液氮罐（气相或液相）。

三、关键注意事项
‌DMSO毒性‌：操作需快速（＜5分钟），避免常温下DMSO损伤细胞。
‌降温速率‌：必须控制≤-1℃/分钟，防止冰晶形成损伤细胞。
‌冻存管密封‌：确保管盖拧紧，防止液氮渗入导致爆管。
‌复苏原则‌：快速融化（37℃水浴1分钟内），避免慢速融化导致胞内结晶。
四、应用场景
该细胞适用于骨组织工程、再生医学及疾病模型构建，如研究骨形成机制或药物筛选。

希望这些信息能帮到你！如果有更具体的操作问题，随时可以再问我。