一抗宿主物种的选择

一抗宿主物种的选择

一般说来，在使用偶联二抗结合无偶联物的一抗时，一抗宿主动物的物种选择较为重要，对于免疫组化而言，尽可能选择与样本不同种系物种的一抗，从而避免二抗与样本内源性免疫球蛋白产生交叉反应，例如：检测小鼠样本蛋白，则不应选择小鼠或大鼠源的一抗，最好选兔源的一抗，则二抗则可选择偶联了检测分子（酶、荧光素、生物素等）的抗兔IgG。如果选择有偶联物的一抗则不适用上述情况，除免疫组化外的其它对不含内源性免疫球蛋白样本的检测方法，则抗体宿主物种的影响不大，如对不含IgG的细胞裂解物样本的western blotting检测，尽管如此，含有血清的组织裂解物和组织培养上清中含有免疫球蛋白，还原变性样本中含IgG，在western blot检测中则结合出现IgG分子50 and 25 kDa的重链和轻链条带。

经过精心雕琢的吸附处理二抗，犹如历经筛选的精致珠宝，每一颗都闪耀着智慧的光芒。自然界中，不同家族的免疫球蛋白虽各领风骚，却共享着相似的骨架结构，如同远方亲戚间微妙的血脉相连。这奇妙的相似性，让抗一物种之矢，偶或偏离靶心，不经意间触动了他族的心弦，引发了交叉反应的微妙乐章。

为了平息这场不期而遇的交响，科学家们施展了精妙绝伦的“吸附魔法”。他们巧妙地利用动物或人类的IgG作为诱饵，引导并吸附那些易于流浪的抗体分子，犹如魔法师以智慧之网，捕捉夜空中误入的流星，从而大大削减了非特异性背景的喧嚣，让实验画面更加纯净，宛如晨曦初露时分，万物清晰可见。

以小鼠的微观世界为例，当探索的目光聚焦于那细腻的组织与活跃的细胞时，科学家们便精心挑选了经过小鼠血清或IgG洗礼的二抗作为向导。这些二抗，仿佛穿上了特制的隐形斗篷，能够巧妙地避开非目标的纷扰，精准锁定，减少了不必要的邂逅与羁绊，确保了每一次结合都如初恋般纯粹而深刻。

然而，这份精准与纯净背后，也伴随着一丝不易察觉的牺牲。在这场精准打击的战役中，部分抗体识别表位的数量，如同夜空中被遮蔽的星辰，黯然失色，不再熠熠生辉。但正是这份牺牲，铸就了实验结果的坚如磐石，让科学的探索之路更加清晰、坚定。
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1.分析试验应用的类型

一般抗体说明书都列出该抗体经试验验证过适用于何种分析类型，如：可以应用于WB IHC ICC ELASA分析等，如果抗体说明书没有提及的应用类型，并不意味着该抗体不适用于此种分析应用类型，而仅是说明尚未经过此种分析试验验证，如果抗体不适用某些分析试验，则会在抗体说明书上标注出来不适于某分析试验。

2.样本蛋白的结构性质

了解样本蛋白的结构性质有助于选择最合适的抗体，至少两方面因素需要考虑待测样本蛋白的结构域：抗体是由各种不同免疫原免疫宿主而制备得来，其中的免疫原包括：全长蛋白、蛋白片断、多肽、全有机体（如：细菌）或细胞，抗体说明书一般都有免疫原的描述，如果打算检测的是蛋白片断或一种特殊的同型物或蛋白全长的某一区域，则必须选择用含此片段域的免疫原制备出的抗体。

如果打算用FACS流式检测活细胞的表面蛋白，则需要选择含该表面蛋白的胞外域来免疫制备的抗体。

l 样本的提取或处理过程：某些抗体要求样本经过某些特殊处理，例如：许多抗体只识别还原和变性的、表位已暴露不受二级四级结构阻碍的蛋白样本，另一方面，某些抗体仅识别天然折叠状态的蛋白。当选择免疫组化的抗体时，应注意某些抗体只识别未固定的冷冻的组织，而另一些抗体则适用于无需抗原修复解交联步聚的甲醛固定石蜡包埋的组织，这些都会在抗体说明书上应用部分标示出来。

3.样本的物种

应选择物种相同或有交叉反应的抗体，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应，因其氨基酸序列同源性较高，如果样本的种类未列入抗体说明书上的交叉反应种属表中，并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体检测验证过，应通过序列比对的方法来预测交叉反应，可应用Expasy和 NCBI BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。