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小鼠心钠肽(ANP)elisa试剂盒操作步骤
发布时间:2024-01-09 15:22 | 点击次数:
小鼠心钠肽(ANP)elisa试剂盒操作步骤:
1. 取出试剂盒,室温(20-25℃)放置 30 分钟。
2. 分组:取出 96 孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准 品组(6 个浓度)、空白孔、待测样品组。 注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。
3. 加样:依照标准品的顺序分别加入 50ul 的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入 50ul 的蒸馏水;其余微孔中加入 50ul 的待测样本。
4. 加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入 100ul 的酶标溶液(空白对照孔除外)。
5. 温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于 37℃恒温孵育 1 小时。
6. 洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置 15-30s,充分清洗酶标板 5 次,用吸水纸*拍干。
7. 显色:各孔加入显色剂 A 液 50ul 后,再加入显色剂 B 液 50ul。
8. 终止:25-37℃下避光反应 10-15 分钟,加入 50ul 终止液。 9. 读板:在 450nm 波长读取各孔的 OD 值。
注意事项:
1. 实验操作中必须使用一次性吸头,避免交叉污染。
2. 加样:加样时,要控制加样速度,避免*孔与zui后一孔间的时间间隔过大,否则将会导致不同的预孵育时间,从而影响 实验的准确性以及重复性。
3. 孵育:严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。
4. 反应时间的控制:加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化,如果颜色较深,请提前加入终止液终止反应。
5. 建议实验前预测样品含量,如样品浓度过高,应对样品进行稀释,计算结果时乘以相应的稀释倍数。
6. 建议使用本试剂盒时先做预实验(即先做标准曲线,试用几个标本),如果对本试剂盒有任何疑问,可和所购经销商, 如果因运输过程导致试剂盒失效,可要求调换,但概不承担产品本身以外的任何损失。