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IRE1α RNase激酶抑制剂(KIRA6)培养操作
发布时间:2022-03-23 15:37 | 点击次数:
IRE1α RNase激酶抑制剂(KIRA6)培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆脱落后,加入1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加入血清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
胃蛋白酶原C(PG-C)ELISA试剂盒
胃蛋白酶原A(PG-A)ELISA试剂盒
胃蛋白酶(PP)ELISA试剂盒
胃蛋白酶(PG)ELISA试剂盒
胃蛋白酶(GT)ELISA试剂盒
未甲基化寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN)ELISA试剂盒
尾肢同源蛋白2(PYGO2/PP7910)ELISA试剂盒
尾加压素2(UST2)ELISA试剂盒
维生素K依赖蛋白Z(PROZ)ELISA试剂盒
维生素K1(VK1)ELISA试剂盒
维生素H(VH)ELISA试剂盒
维生素E(VE)ELISA试剂盒
维生素D受体(VD R)ELISA试剂盒
维生素D结合蛋白(DBP)ELISA试剂盒
维生素D3(VD3)ELISA试剂盒
维生素D2(VD2)ELISA试剂盒
维生素D(VD)ELISA试剂盒
维生素C(VC)ELISA试剂盒
维生素B6(VB6)ELISA试剂盒
维生素B3(VB3)ELISA试剂盒
维生素B2(VB2)ELISA试剂盒
维生素B12(VB12)ELISA试剂盒