传代种细胞选择标准

      许多同学对细胞消化做了许多研究，得出了很多有价值的经验，也见到很多人的困惑。其实细胞培养，尤其是细胞系的培养，就消化而言，不是太难，做得多了，善于总结经验，就能把细胞越养越好。一般的程序步骤，细节操作，
应选择形态良好、正常健康、分布均匀的细胞瓶细胞。选择形成单层或致密单层的处于对数生长期的细胞瓶细胞,选择培养液p大于6.8~7.0的细胞瓶细胞
     
细胞消化
细胞消化液为含0.25%胰蛋白酶和0.025%EDTA消化液,建议使用 Hanks’液或PBS溶液配制,pH为8。细胞消化配制后应及时使用
将细胞生长良好的培养瓶,轻微摇瓶后倒去细胞培养液,加入适量细胞消化液,转动细胞瓶使细胞消化液浸润细胞1~3分种,倒去细胞消化液,静止细胞瓶待细胞滑落,加入细胞培养液,摇瓶分散细胞。
细胞分种、细胞培养按1:6~1:9分种比例分种细胞。选择合适的分种比例,应控制分种后培养1天时细胞汇合率为40%~-80。
细胞培养液使用血清含量为4~5%。
15L转瓶细胞培养液加量为2~2.5L。
15L转瓶细胞培养温度为37士0.5℃,转数10~12rpm。
细胞培养时间为2天,细胞应生长为致密单层,pH应大于6.8~7.0当细胞生长为致密单层后应及时传代。