胆盐乳糖培养基（BL） 药典培养注意事项

胆盐乳糖培养基（BL） 药典培养注意事项:
1. 收到后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现 象发生请及 时和我们联系。
2. 仔细阅读说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、比例、所需细胞因子等，确保细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担。
3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活 力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。
4.静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8mL 维持细胞正常培养，待细 胞汇 合度80%左右时正常传代。
5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。
6.建议客户收到后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和 志伟技术 部 沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系，告知细胞的具体情况，以便我们 的技术人员跟踪回访直至问题解决。

胆盐乳糖培养基（BL） 药典复苏操作流程
1. 准备工作，开水浴锅，预热试剂，超净工作台紫外照射 30min,找到对应细胞在液氮罐中的位置
2. 紫外照射后风机吹 10min 后，酒精擦拭台面，放入试剂和离心管，取 15ml 离心管，加入 9ml 培养液
3. 在液氮罐中取出细胞，先拧松放液氮，再拧紧，将冻存管放入 PE 手套中，然后水浴融化后取出，1-2min
4. 将冻存管喷酒精后放入超净台内，擦干管壁，用 1ml 头将细胞转移到已加培养液的离心管中
5. 800-1000rpm 离心 5min,注意配平
6. 将离心好的细胞弃上清，加入 5ml 完全培养基重悬，用移液管吹打 8-10 次， 避免产生气泡，将细胞悬液接种到 10cm 培养皿中，补加 5ml 培养液
7. 混匀，十字法或者 8 字法
8. 将混好的细胞放入培养箱中培养