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买的是Bovogen北美胎牛血清,要灭活吗?

发布时间:2020-08-24 16:20 |  点击次数:452

     在实验室处理血清的时候,有一次水浴箱在灭活过程中出现故障,温度升高到80℃,血清变成了凝胶状 ,我重新处理了另外一份血清,将两份血清对比,发现高温直接影响到血清所含的抗体蛋白。在56℃下灭活半小时以 上,肯定也会对里面的蛋白起到破坏作用。下次有机会我做个延长灭活时间的实验试试,看看到底有多大的影响。热 灭活之后,血清放在四度冰箱久了,就会有沉淀产生,这常常会被认为是微生物污染或者是黑胶虫污染。为了验证到 底有没有污染,常常又会把血清放置37℃温育,但是血清中的蛋白会进一步析出,最后还是要做镜检,无菌培养试验 ,和革兰氏染色试验,非常麻烦。
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   那买的是Bovogen北美胎牛血清,要灭活吗?有些说法是需要,有些说直接解冻后就可以加入到培 养基中;我配制胰蛋白酶液,用的是D-PBS,有关系吗?
   关于血清的热灭活,是很多人感兴趣也存在一定争议的话题。大多数实验室将血清的热灭活还是作为 常规来执行,因为有两个作用,第一是灭活补体,第二是灭活血清中可能存在的支原体。但是实验者并没有考虑热处 理对血清中的生长因子、氨基酸等成分带来的负面影响。
   常规灭活建议的温度在45℃到62℃之间, 而时间则从15分钟到60分钟不等。其中最常用的手法是56℃热处理30分钟。随着血清采集、处理、加工工艺的提高 ,许多早先认为是热灭活的原因已经不再成立,只有少数对血清进行热灭活的研究者在实验中证实了这一步骤的有效 性和必要性。有人比较过11个不同细胞株,发现其中热灭活对6 个细胞株(HBAE,MDBK,Vero,成纤维细胞,MRC-5) 的生长带来负面影响,三个细胞株(FOX-NY,MDCK和CHO-K1)不受热灭活的影响,而只有两个细胞株(Balb/3T3, Sp2/0Ag14 hybrid),在热灭活之后,细胞生长有轻微的改善。所以,在正常的操作下,热灭活通常对细胞的生长没 有明显的促进作用。
 

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