通用型DNA纯化回收试剂盒——从PCR反应液或酶切反应液中回收DNA操作步骤

通用型DNA纯化回收试剂盒——从PCR反应液或酶切反应液中回收DNA操作步骤

1．柱平衡步骤：向吸附柱CB2中（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12000rpm（~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）

2．估计PCR反应液或酶切反应液的体积，向其中加入等倍体积溶液PC，充分混匀（无需去除石蜡油或矿物油）。

注意：对于回收<150 bp的小片段可将溶液PC的体积增加到3倍以提高回收率；溶液混匀后应呈现黄色，即可进行后续操作。如果溶液的颜色为桔红色或紫色，请使用10 μl 3M乙酸钠（pH 5.0）将溶液的颜色调为黄色后再进行后续操作。

3．将上一步所得溶液加入一个吸附柱CB2中（吸附柱放入收集管中），室温放2 min，12000rpm （~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱放入收集管中。

注意：吸附柱容积为800 μl，若样品体积大于800 μl可分批加入。

4．向吸附柱CB2中加入600 μl漂洗液PW （使用前请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CB2放入收集管中。

注意：如果纯化的DNA是用于盐敏感的实验，例如平末端连接实验或直接测序，建议PW加入后静置2-5 min再离心。

5．重复操作步骤4.

6．将吸附柱CB2放回收集管中，12000rpm （~13400×g )离心2 min，尽量除去漂洗液。将吸附柱CB2置于室温放置数分钟，彻底地晾干。

注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。

7．将吸附柱CB2放入一个干净的离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加适量的洗脱缓冲液EB，（如果回收的目的片段>4 kb，则洗脱缓冲液EB应置于65-70℃水浴预热），室温放置2 min。12000rpm （~13400×g )离心2 min收集DNA溶液。

注意：洗脱液的体积不应少于30 μl，体积过少会影响回收的效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有较大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0-8.5范围内，且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为了提高DNA的回收量，可将离心得到的溶液重新加回离心吸附柱中，室温放置2 min，12000rpm（~13400×g)离心2 min，将DNA溶液收集到离心管中。