小鼠瘦素（Leptin）elisa检测试剂盒实验用途

小鼠瘦素（Leptin）elisa检测试剂盒实验用途：是一种内分泌激素（167个氨基酸），主要在脂肪组织中表达，通过下丘脑对机体内能量的消耗和摄取起着重要的调节作用。OB基因的发现和克隆是体重调控机制研究的重大突破，揭示了脂肪组织具有内分泌的重要功能。Leptin受体OB-R是Leptin作用于下丘脑的一座桥梁，Leptin通过下丘脑的特定受体抑制摄食、增加能量消耗,在脂肪蓄积、体重调节中起着重要作用。所提供的elisa检测试剂盒是典型的夹心法酶联免疫吸附测定elisa检测试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体，经生物素（biLeptinin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。

试剂准备：
1. 小鼠瘦素（Leptin）elisa检测试剂盒说明书使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC)，试剂不能直接在37oC溶解。
2. 标准品(冻干品)：每瓶标准品加入标准品稀释液1mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为2000pg/mL。准备7个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入150μL的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成不同的梯度， 标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
3. 浓洗涤液：用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL，进行30倍稀释。