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外周血培养基配制的过程

发布时间:2018-08-06 09:55 |  点击次数:544

外周血培养基适用于短期外周血培养,用于染色体分析。培养基冷冻包装,解冻使用。其配制的过程基本如下:
   一、配制用水

   培养基的大部分是水,所以水的质量直接影响培养基的质量。按Waymouth标准,水的电阻应为200万欧姆,一般实验室里以玻璃蒸馏器制备的

   双蒸水或三蒸水可以符合使用条件。

   二、培养基

   培养基有天然、人工两种。一般实验室使用的是RPMI-1640粉末培养基,以双蒸或三蒸水配制。NaHCO3(或HCl)调pH至7.2-7.4,若pH值超过7.6或远低于6.8,则大多数细胞不能生长。RPMI-1640不耐高压灭菌,使用前需经灭菌0.22μm孔径滤膜滤过处理。

   三、血清

   培养中常使用小牛血清(或胎牛血清)。血清亦不能高压灭菌,无菌的小牛血清需在56℃水浴30分钟灭活补体,置4℃冰箱存放待用。配制时含量视培养细胞种类、时间而定,一般用10—15%。由于血清成分复杂、条件不易控制,可选用无血清培养基。

   四、抗菌素

   为防止培养时期细菌的污染,可在培养基中添加适当抗菌素,一般用量与组织细胞培养相同:卡那霉素100单位/毫升,或双抗--青霉素100单位/毫升,链霉素100微克/毫升。

   五、植物血凝素(PHA)

   非增殖期的细胞不能制备染色体,如人外周血淋巴细胞,但在离体培养过程中,在PHA的作用下,可被刺激转化为淋巴母细胞而进入有丝分裂。

   经实验测定其分裂高峰分别于培养后44-48小时和68-72小时。

   PHA有粘多糖,蛋白质两种重要成分。粘多糖促使有丝分裂,蛋白质起凝集作用。PHA激活的细胞数随其浓度而增加,直至全部免疫活性细胞均

   被激活为止,但PHA浓度过高会引起凝集,一般采用4%浓度为好。

 Phospho-NMDAR2B (Ser1480)     蛋白磷酸酶2Cα抗体    
 Phospho-NMDAR2B (Tyr1070)     蛋白磷酸激酶PKC/CPI-17抗体    
 Phospho-NMDAR2B (Tyr125)     蛋白裂解酶(一种新的癌基因)抗体    
 Phospho-NMDAR2B (Tyr1336)     蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型4抗体    
 Phospho-NMDAR2B (Tyr1472)     蛋白酪氨酸磷酸酶非受体型11抗体    
 Phospho-NMDAR2B (Tyr840)     蛋白酪氨酸磷酸酶CD148抗体    
 Phospho-NPM (Ser4)     蛋白酪氨酸磷酸酶-1B    
 Phospho-NPM (Thr199)     蛋白酪氨酸激酶JAK-3抗体    
 Phospho-NPM (Thr95)     蛋白酪氨酸激酶BAP135抗体    
 phospho-Nrf2 (Ser40)     蛋白酪氨酸激酶ATK抗体    
 Phospho-NuMA (Ser395)     蛋白聚糖Versican抗体    
 

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