细胞培养的技术

  培养物可以是单个细胞或细胞群，培养方式可大致分为两种：一种是群体培养(Mass Culture),将含有一定数量的细胞置于培养器皿中，细胞贴壁或悬浮生长,贴壁细胞汇合(Confluence)后形成均匀的单细胞层；另一种是克隆培养(Clonal Culture),将细胞群分散成游离的单细胞，经高度稀释后,分别加入培养器皿或微孔中,使彼此距离较远或使每孔只有1个细胞,进行单个细胞培养。各单个细胞经过分裂增殖，形成一个个的细胞集落，这种细胞集落就称为克隆(Clone）一个细胞克隆中的所有细胞均来源于同一个祖先细胞。
  原代培养也是建立各种细胞系(株)必经的阶段。假如原代培养能够维持几小时甚至更长，即可进行进一步筛选。有的细胞具有继续增殖能力，有的细胞类型只是存活而不会增殖；另有一些细胞只在特殊条件下被应用，此外细胞的类型与分布也会发生改变。在单层培养的情况下，细胞汇合以后，瓶底全部铺满，对密度有依赖性的细胞则由于接触抑制，生长逐渐减缓或停滞，而失去密度依赖性的细胞还会继续生长，天然或自发转化的细胞则过度生长。借助于频繁传代，保持细胞低密度生长，有利于保存细胞的正常表型(如小鼠成纤维细胞)。而自发转化则倾向于高密度的细胞过度生长。
   原代培养物传代成功后，则称之为细胞系(Cell Line)。细胞系的生存期若有限，则称之为有限细胞系(Finite Cell Line)；已获无限增殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系(Infinite Cell Line)。无限细胞系大多已能永生，其染色体发生异倍化，具异倍体核型，有的可能已成为恶性细胞，因此本质上已是发生转化的细胞系。细胞获得永生性(Immortality)或恶性性(Malignancy)是衡量细胞是否发生转化的重要标志之一。无限细胞系有的只有永生性(或不死性)，即仍保留接触抑制的细胞生长特性，但不具有异体接种成瘤的特性；有的则不仅具有永生性，而且获得了异体接种成瘤的特性。接触抑制(Contact Inhibition)是区分正常细胞与肿瘤细胞的重要标志之一。它是指接种细胞在培养初期数量较少，增生快；随着数量的不断增加，细胞逐渐汇合成片，细胞的运动受到抑制，增生反而减慢的现象。